Phản ứng M.R. Đỏ Methyl - Methyl Red Phản ứng V.P. Voges-Proskauer

3.5. Phản ứng M.R. Đỏ Methyl - Methyl Red

 Môi trường: Pepton 5 g
Glucoza 5 g K
2
HPO
4
hoặc NaCl 5 g
Nước cất 1000 ml. pH = 7,0 - 7,2.
Phân môi trường vào ống nghiệm 4-5 ml, khử trùng ở 115 C trong 30 phút.
 Thuốc thử: Đỏ Methyl 0,1 g
Etanol 95 300 ml Nước cất 200 ml.
 Cấy vi khuẩn vào môi trường lặp lại 2 lần, đặt ở nhiệt độ thích hợp trong 2-6 ngày nếu kết quả âm tính cần kéo dài thêm thời gian. Với Vi khuẩn đường ruột thuộc họ
Enterobacteriaceae, đặt ống nuôi cấy ở 37 C và kiểm tra sau 4 ngày.
 Nhỏ 1 giọt thuốc thử vào dịch nuôi cấy, nếu chuyển màu đỏ là phản ứng dương tính, màu vàng là âm tính màu đỏ ở pH 4,4; màu vàng ở pH 6,0.
Hình 3.2. Chất chỉ thị đỏ methyl chuyển màu khi tiếp xúc
với dịch nuôi cấy vi khuẩn lên men đường.

3.6. Phản ứng V.P. Voges-Proskauer

 Môi trường: xem phần 3.5.  Thuốc thử:
Creatin 0,3 hoặc để nguyên dạng tinh thể NaOH 40
 Cấy vi khuẩn mới hoạt hoá, đặt ở nhiệt độ thích hợp trong 2-6 ngày.  Bổ sung NaOH 40 bằng thể tích dịch ni cấy, sau đó nhỏ một ít dung dịch creatin
hoặc thêm một ít tinh thể, đợi khoảng 10 phút có khi lâu hơn. Nếu dịch thể chuyển màu đỏ là phản ứng dương tính.
Cách khác:
 Môi trường Clark-Lubs: Pepton 3 g
K
2
HPO
4
5 g Glucoza 5 g
pH = 7,5.  Phản ứng V.P: nhỏ 5 giọt dung dịch alpha naphtol 6 trong cồn 90, giữ ở 4 C
trước khi dùng và 5 giọt NaOH 16 trong nước, lắc nhẹ. Nếu dịch thể chuyển sang màu đỏ nâu là phản ứng dương tính, màu vàng nhạt là âm tính.
 Phản ứng M.R: nhỏ 2-3 giọt dung dịch Đỏ methyl 0,5 trong cồn 60, lắc nhẹ. Nếu dịch thể chuyển màu đỏ là phản ứng dương tính, màu vàng nhạt hay khơng màu là âm
tính.
Hình 3.3. Ví dụ minh hoạ kết quả phản ứng V.P. và M.R.

3.7. Phản