III.Nuôi cấy giao tử,tạo cây đơn bội invitro
Bạn đang xem bản rút gọn của tài liệu. Xem và tải ngay bản đầy đủ của tài liệu tại đây (1.31 MB, 28 trang )
Theo 2 phương pháp
• Các bao phấn được nuôi cấy trên môi trường có
agar hoặc môi trường lỏng và sự phát sinh phôi xảy
ra trong bao phấn.
• Hạt phấn được tách rời khỏi bao phấn hoặc bằng
phương pháp cơ học hoặc do nứt nẻ tự nhiên của
bao phấn và được nuôi trên môi trường lỏng.
Quy trình nuôi cấy
• Chọn bao phấn: hoa đầu tiên,hạt phấn thể 4 nhân
sau lần nguyên phân thứ nhất
• Xử lý nụ hoa: bằng nhiệt độ kích thích sự phân chia
hạt phấn
• Chọn mt tái sinh thích hợp
• Chọn lọc cây đơn bội: đếm số lượng NST,đo
hàm lượng DNA,so với cây mẹ
Sơ đồ tạo cây đơn bội từ nuôi cấy
bao phấn
Khử trùng bề mặt
Tách các bao phấn
Hoa
Loại bỏ chỉ nhị
Nhuộm acetoarmine để xác định
GĐPT của hạt phấn
Nuôi cấy trên
mt đặc
Phát triển phôi
Cây đơn bội
Nuôi cấy trên
mt lỏng
• Ưu điểm
Môi trường nuôi cấy đơn giản
Tạo ra giống cây trồng sạch bệnh, có phẩm chất di
truyền đồng đều
Phát sinh phôi dễ dàng
Thuận lợi cho việc nghiên cứu di truyền.
• Nhược điểm
Hiệu suất tạo cây đơn bội không cao
Khó sàng lọc cây đơn bội
Khi nuôi cấy bao phấn thường gặp hiện
tượng bạch tạng
IV.Nuôi cấy tế bào trần
Phương pháp cơ bản để tách và nuôi cấy
1.Tách tế bào trần
• Khử trùng mẫu lá
• Ngâm mẫu trong dung dịch thẩm thấu để tế bào
co nguyên sinh chất
• Tách lớp mặt dưới lá
• Ngâm mẫu trong hỗn hợp enzym
• Tinh sạch tế bào trần
• Nuôi cấy tế bào trần trong môi trường thích hợp
2.Tạo cây đơn bội bằng nuôi cấy noãn chưa thụ tinh
Nguyên lý:
nuôi cấy noãn chưa thụ tinh phát triển thành cây đơn bội
là sự sinh sản đơn tính cái
Theo 2 phương pháp
• Nuôi cấy noãn chưa thụ tinh tách rời
• Nuôi cấy cùng lúc nhiều noãn trên 1 phần của lõi bắp
Gặp khó khăn trong việc tách tb noãn cũng như dễ làm
tổn thương mô
