B. Enzym giới hạn: Phát hiện enzym giới hạn

B. Enzym giới hạn





Các enzym giới hạn có hai đặc tính:

 Không cắt các liên kết phophodieste ở

đầu tận cùng, thay vào đó là cắt bên

trong phân tử ADN.

 Chỉ cắt khi nhận ra các trình tự đặc thù,

thường gồm 4 – 8 nucleotit, tạo ra các

đoạn ADN có đầu dính (bổ trợ) hoặc đầu

bằng.



Ví dụ: Eco RI thường

cắt ở trình tự đọc

theo chiều xuôi –

ngược như nhau.



Một số enzym giới hạn và tính chất

Tên enzym



Nguồn vi khuẩn



Trình tự nhận biết

trên ADN



Cắt đầu dính:

Sau3A



Staphilococus aureus 3A



5’-↓GATC- 3’

3’- CTAG ↑-5’



EcoRI

BamHI

NotI

SacI

HaeIII

Cắt đầu bằng

HpaI

ScaI



Escherichia coli

Bacillus amiloliquefaciens

Norcadio otitidis-caviarum

Streptomyces

achromogenes

Haemophilus aegyptius

Haemophilus

paraipluenzae

Streptomyces caespitosus



5’-G↓AATT C-3’

3’-C TTAA↑G-5’

5’-G↓GATC C-3’

3’-C CTAG↑G-5’

5’-G↓CGGCCG C-3’

3’-C GCCGGC↑G-5’

5’-G AGCT↓C-3’

3’-C↑TCGA G-5’

5’-G CGT↓C-3’

3’-C↑GC G-5’

5’-GTT↓AAC-3’

3’-CAA↑TTG-5’

5’-AGT↓ACT-3’

3’-TCA↑TGA-5’



Số

nucleotit

của đoạn

trình tự

nhận biết



4

6

6

8

6

4



6

6



C. Vector tách dòng: Đặc điểm

1.



Phải có trình tự khởi

đầu sao chép để có

khả năng tự sao chép

trong tế bào chủ.



2. Có thể nhận biết nhờ

các gen chỉ thị/hoặc

gen đánh dấu (phải

có dấu chuẩn chọn

lọc).

3. Có vị trí gắn phân tử

ADN ngoại lai (vị trí

đa

tách

dòng

–

Multicloning

site

/

MCS).



Vị trí đa tách dòng