Hình 3.2: Quy trình chạy sắc ký cột bằng phương pháp một giai đoạn
Bạn đang xem bản rút gọn của tài liệu. Xem và tải ngay bản đầy đủ của tài liệu tại đây (2.57 MB, 87 trang )
3.3.2. Thí nghiệm 2: Nghiên cứu tinh chế dầu tảo bằng phương pháp sắc ký cột 2
giai đoạn.
Mục đích thí nghiệm: nghiên cứu ảnh hưởng của tỉ lệ khối lượng silicagel và dầu
tảo thích hợp để thu được dầu tảo có độ tinh khiết cao.
Yếu tố nghiên cứu: tỉ lệ khối lượng thích hợp của silicagel và dầu tảo.
Yếu tố cố định: khối lượng silicagel so với khối lượng dầu tảo.
Chỉ tiêu đánh giá: hiệu suất thu hồi dầu tinh, thể tích hexan cần dùng để chạy cột.
Bố trí thí nghiệm: Thí nghiệm được bố trí theo kiểu khối ngẫu nhiên đầy đủ
(RCBD). Bố trí 2 khối, mỗi đợt nguyên liệu là một khối.
Khối
Nghiệm thức
Tỉ lệ dầu tảo/silicagel
(g/g)
1
2
0.5/8
0.75/8
0.75/8
1/8
1/8
0.5/8
Ghi chú: Khối 1 và 2: tảo Chlorella Vulgaris thiết bị 40 lít trong 2 đợt khác nhau.
30
Phương pháp thực hiện:
Dầu thô
Giai đoạn1
Sắc ký cột
Bã silicagel
Dầu tinh 1,
UV≤0,001 A
Dầu không tinh,
UV> 0,001A
Giai đoạn2
Ngâm hexan
Chạy cột
Sắc ký cột
Thu
Dầu tinh 2
Dầu tinh1
Hình 3.3: Quy trình chạy sắc ký cột qua 2 giai đoạn
Mơ tả thí nghiệm: Cột sắc ký được nhồi với khối lượng silicagel là 8 gram, chiều
cao cột nhồi là 11cm. Dầu tảo thơ được pha lỗng với hexan theo tỉ lệ 1/100 (theo khối
lượng).
Giai đoạn 1: Tiến hành chạy cột và đo UV dịch thu được. Khi độ UV đạt 0,001 A,
tiến hành thu dịch, cho đến khi độ hấp thu quang bằng 0. Cô quay dịch thu được và đem
sấy ở 40 oC, trong 24 giờ.
Trường hợp dịch có UV >0,001 A, thu dịch đó (dịch B) và tiếp tục chạy cột với
hexan. Khi UV dịch mới đạt 0,001 A, thu dịch, cho đến khi độ quang giảm xuống 0 A. Cô
quay dịch thu được và đem sấy ở 40 oC, trong 24 giờ. Đối với phần dịch có độ hấp thu
OD >0,001 A (dịch B), tiếp tục giải ly với hexan trên cột mới với khối lượng silicagel
nhồi là 6 gram. (Phần dịch này loãng hơn ban đầu nên ta giảm bớt khối lượng silicagel
nhồi trên cột).
31
Giai đoạn 2: bã silicagel được ngâm hexan trong 1 giờ, sau đó đem lọc phần dịch.
Phần dịch này được chạy sắc ký cột với các bước giống như giai đoạn 1.
3.3.3. Thí nghiệm 3: Tách phân đoạn dầu tảo bằng sắc ký cột silicagel với tỉ lệ dung
môi theo hai phương pháp: phương pháp của George A. Fischer và Jon J. Kabara
(1964) và phương pháp cải biên của đề án EEP-3-V-053
Mục đích thí nghiệm: Nghiên cứu tách phân đoạn dầu tảo bằng phương pháp sắc
ký cột silicagel theo phương pháp của Fischer và Kabara, so sánh hai phương pháp: phân
đoạn dầu theo tỉ lệ dung môi của phương pháp Fischer +Kabara (cột 1) và phân đoạn dầu
theo tỉ lệ dung môi của phương pháp cải biên đề án EEP-3-V-053 (cột 2).
Yếu tố nghiên cứu: Tỉ lệ dung mơi thích hợp dùng phân đoạn dầu
Yếu tố cố định: Khối lượng dầu tảo so với khối lượng silicagel.
Chỉ tiêu đánh giá: Tỉ lệ dầu qua các phân đoạn, màu sắc dầu qua các phân đoạn.
Bố trí thí nghiệm: Thí nghiệm được bố trí theo kiểu khối ngẫu nhiên đầy đủ
(RCBD). Thí nghiệm có 2 nghiệm thức, mỗi nghiệm thức có 2 lần lặp lại, bố trí 2 khối,
mỗi đợt nguyên liệu là một khối.
Khối
Tỉ lệ dung môi
1
2
(20:50:70)
(22:57:79)
(22:57:79)
(20:50:70)
32
Phương pháp thực hiện:
Dầu tảo thô (0.2 g)
Sắc ký cột silicagel, phân
đoạn 1
5% Diethyl ether trong hexan
Sắc ký cột silicagel, phân
đoạn 2
15% Diethyl Ether trong Hexan
Sắc ký cột silicagel, phân
đoạn 3
Hình 3.4: Quy trình tách phân đoạn dầu theo hai phương pháp: của Fisher và Kabara và
của đề án EEP-3-V-053
Cột silicagel có kích thước 1,6 x 30 cm, khối lượng silicagel nhồi cột là 8 g, chiều
cao cột nhồi là 11 cm, cột được hoạt hóa bằng hexan trước 15 phút trước khi giải ly. Khối
lượng dầu tảo thơ là 0,2 g, mẫu được pha lỗng bằng 12 ml hexan. Cột được chạy phân
đoạn với các dung môi lần lượt là:
Cột 1 theo Fisher
Cột 2 theo tỉ lệ cải biên
+Kabara
của đề án EEP-3-V-053
Hexan
20
22
2
5% Diethyl ether+hexan
50
57
3
15% Diethyl ether+hexan
70
79
Phân đoạn
Thể tích tổng (ml)
1
Ghi chú: đã có 12 ml hexan khi pha lỗng, cộng với 20 ml lúc chạy.
33
3.3.4. Thí nghiệm 4: Định tính các thành phần trong dầu phân đoạn (tỉ lệ dung môi
theo phương pháp cải biên của đề án EEP-3-V-053) bằng phương pháp sắc ký bản
mỏng
Mục đích thí nghiệm: Kiểm tra các thành phần dùng sắc ký bản mỏng của dầu đã
qua phân đoạn bằng sắc ký cột silicagel theo tỉ lệ dung môi dựa trên phương pháp của đề
án EEP-3-V-053.
Yếu tố nghiên cứu: Thành phần của dầu trong các phân đoạn.
Phương pháp thực hiện:
Chuẩn bị mẫu dầu trong các
phân đoạn
Chuẩn bị tấm bản mỏng, ống
vi quản, dung mơi giải ly
Dùng ống vi quản chấm ít
mẫu lên bản mỏng
Khai triển giải ly để dung môi
di chuyển lên
Sấy khô tấm bản mỏng
Hiện hình các vết trên bảng
mỏng bằng H2SO4 50%
Hình 3.5: Các bước chuẩn bị và tiến hành sắc ký bản mỏng
34
